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一种阿魏酸体外抗氧化活性的测定方法

发布时间: 2022-05-16

基本信息

合作方式： 技术转让
成果类型： 发明专利
行业领域：
其他
成果介绍

本发明的目的是提供一种对共表达阿魏酸酯酶/木聚糖酶的酶解产物阿魏酸进行体外抗氧化活性的测定方法。利用共表达阿魏酸酯酶A和木聚糖酶的酵母系统(GS115/faeA-xyn11A)所产的共表达酶液水解小麦麸皮获得阿魏酸,从还原力、DPPH自由基和羟基自由基清除率三个方面对该阿魏酸进行体外抗氧化活性的测定。实验结果证明阿魏酸有良好的还原能力和自由基清除能力,该测定方法简单有效、方便快捷,在工业应用中阿魏酸的抗氧化测定方面有一定的潜在价值。

  • 1.阿魏酸的生产方法： 以预处理麦麸为底物，称取***于摇瓶中，加入***共表达粗酶液，然后加入磷酸盐缓冲液(1mM，***)至终体积30mL，将反应体系在40℃保温12h，收集酶解液，将10mL麸皮水解液以1mL/min上大孔树脂柱进行动态吸附，待吸附结束静置2h后，用蒸馏水缓慢洗脱，流速为1mL/min，分批收集洗脱液，待水洗液中不再含有还原糖、色素等杂质后，改用50％的乙醇进行洗脱，流速为***，收集洗脱液，置于真空旋转蒸发仪中浓缩至终体积为10mL。
  • 2.阿魏酸体外抗氧化活性验证： (1)还原力的测定：在具塞试管中加入*** PBS缓冲液(***)，2mL1％铁氰化钾溶液和1mL不同浓度的阿魏酸样品溶液，于50℃恒温水浴反应20min，立即冷却，加入***％三氯乙酸溶液，4000rpm离心8min，取2mL上清液，加入1mL1％三氯化铁溶液和***蒸馏水，振荡混匀，静置5min后，在700nm处分别测定吸光度值，结果阿魏酸的还原能力随着浓度的升高而呈现稳定的增长趋势，并呈现出一定的量效关系，20μg/mL阿魏酸的还原能力是4μg/mL阿魏酸的***倍，以蒸馏水代替阿魏酸溶液作为对照； (2)清除DPPH自由基活性的测定：在具塞试管中加入3mL8×10-5M DPPH乙醇溶液，1mL无水乙醇和1mL不同浓度的阿魏酸溶液，混匀，室温避光放置30min，于517nm处分别测定吸光度值Ax，以无水乙醇代替阿魏酸溶液为对照，测定其值为Ao，乙醇代替DPPH的测定值为Axo，DPPH自由基清除率(％)＝[Ao-(Ax-Axo)]/Ao×100；结果表明阿魏酸的抗氧化能力随着浓度的增高而增强，当阿魏酸浓度为8μg/mL时，其自由基清除率为***％，而当阿魏酸浓度为16μg/mL时，其DPPH·清除率则上升为***％； (3)清除羟基自由基活性的测定：在具塞试管中依次加入2mL5mM FeSO4，1mL不同浓度的阿魏酸溶液，1mL10mM H2O2和1mL10mM水杨酸，37℃恒温水浴摇床中反应15min，立即冷却，离心后取上清液于510nm分别测定吸光度值Ax，以水杨酸代替阿魏酸溶液为对照，测定其值为Ao，水杨酸代替双氧水的测定值为Axo，羟基自由基清除率(％)＝[Ao-(Ax-Axo)]/Ao×100；结果表明，低浓度的阿魏酸就表现出良好的羟基自由基清除率，并随着阿魏酸浓度的增加，相应的羟基自由基清除能力也呈现出稳定的增长趋势，当阿魏酸浓度为20μg/mL时，其羟基自由基清除率达到92％。
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