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一种生产2-KLG的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌及其应用
发布时间: 2022-05-16
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
发明专利
行业领域：
其他
成果介绍
本发明公开了一种生产2-KLG的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌及其应用,本发明通过基因工程技术,将来源于普通生酮基古龙酸菌(Ketogulonigenium vulgare)的山梨糖脱氢酶(SDH)、山梨酮脱氢酶(SNDH)基因,通过连接肽连接后表达于氧化葡萄糖酸杆菌中,获得了高效生产2-KLG的***工程菌。***是二步发酵法生产2-KLG中第一步发酵过程常用菌种,将sdh、sndh基因表达于***中,可以解除小菌对伴生菌依赖的问题,实现了从D-山梨醇到2-KLG的直接转化,简化了维生素C生产工艺,2-KLG的产量可达***,具有很好的应用前景。
- 1.一种生产2-KLG的氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)基因工程菌，其特征在于表达外源sdh、sndh基因，所述外源sdh、sndh基因通过连接肽连接。
- 2.权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于所述sdh、sndh基因核苷酸序列如KVU-0203、NCBI登陆号为***，KVU-0095NCBI登陆号为***所示。
- 3.权利要求1所述的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌，其特征在于所述连接肽为GGGGS、GGGGSGGGGS、GGGGSGGGGSGGGGS、PTPTP、PTPTPTPTP、PTPTPTPTPTPTPTP、EAAAK、EAAAKEAAAK、EAAAKEAAAKEAAAK或SSSNNNNNNNNNN。
- 4.权利要求1所述基因工程菌的构建方法，其特征在于包括如下步骤： 1)根据本NCBI公开的sdh(NCBI登陆号为***）、sndh(NCBI登陆号为***)基因序列设计引物克隆或采用化学全合成法sdh、sndh基因，通过融合PCR将sdh和sndh以不同的连接肽进行连接； 2)将融合后的基因与载体连接得到重组表达载体； 3)将得到的重组表达载体转化氧化葡萄糖酸杆菌后得到产2-KLG的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌。
- 5.权利要求1所述氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌在发酵生产2-KLG中的应用。
- 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于具体步骤为：将所述氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌接种于装有50mL液体培养基(含有终浓度75μg/mL氨苄青霉素)的500mL双刺摇瓶中，30℃旋转式摇床200r/min振荡培养至对数生长期，按15%(v/v)接种量转接至终浓度75μg/mL氨苄青霉素的新鲜培养基，再培养至对数生长期，按15%(v/v)接种量转接发酵培养基，30℃，200r/min，发酵168h。
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