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一种高产异淀粉酶的基因工程菌及其发酵工艺

发布时间: 2022-05-12

基本信息

合作方式： 技术转让
成果类型： 发明专利
行业领域：
其他
成果介绍
  • 1.一种高产异淀粉酶的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以***为宿主，表达来源于嗜热裂孢菌（Thermobifida fusca）的异淀粉酶，所述异淀粉酶的核苷酸序列如SEQ ID ***所示，所述基因工程菌的构建方法是：将核苷酸序列为SEQ ID ***的异淀粉酶基因连接到表达载体pSX2上，然后再转化到大肠杆菌***中，筛选正确的转化子，即得到基因工程菌***（Tfu_1891/pSX2）。
  • 2.一种利用权利要求1所述基因工程菌发酵生产异淀粉酶的方法，其特征在于，所述方法是在发酵罐中，采用一次诱导或者二次诱导或者三次诱导的策略发酵生产异淀粉酶，所述二次诱导方法包括：（1）分批发酵阶段：将种子液以7-9%接种量接种于发酵罐中，控制温度35-38℃、溶氧20-30%、pH ***；（2）补料发酵阶段：待溶氧上升至80-100%，进行补料培养，控制温度30-38℃、溶氧20-30％、pH ***；（3）诱导培养阶段：当菌体细胞浓度达到20-35 g/L、57-83 g/L，分别加入IPTG诱导产酶，控制温度30-38℃、溶氧20-30%、pH ***，诱导8-23 h。
  • 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法具体是：（1）将种子液以8%接种量接入发酵培养基，控制溶氧30%、温度37℃、pH ***；（2）待溶氧上升至80-100%，以指数流加的方式补加补料培养基；（3）当细胞浓度达到*** g/L、*** g/L时，分别加入IPTG至IPTG终浓度为*** mM，于37℃下诱导产酶，溶氧维持在30%、pH控制在***。
  • 4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述一次诱导策略是策略（1）或者策略（2）：策略（1）：分批发酵阶段：将种子液以7-9%接种量接种于发酵罐中，控制温度35-38℃、溶氧20-30%、pH ***，当细胞浓度达到*** g/L-4 g/L时加入IPTG诱导产酶；补料发酵阶段：待溶氧上升至80-100%，进行补料培养，控制温度36-38℃、溶氧20-30％、pH ***，诱导19-27 h； 策略（2）：分批发酵阶段：将种子液以7-9%接种量接种于发酵罐中，控制温度35-38℃、溶氧20-30%、pH ***；补料发酵阶段：待溶氧上升至80-100%，进行补料培养，控制温度30-38℃、溶氧20-30％、pH ***；诱导培养阶段：当菌体细胞浓度达到20-35 g/L时，加入IPTG诱导产酶，控制温度30-38℃、溶氧20-30%、pH ***，诱导8-23 h。
  • 5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括：（1）将种子液以7-9%接种量接种于发酵罐中，控制温度35-38℃、溶氧20-30%、pH ***，当菌体细胞浓度达到*** g/L-4 g/L时加入IPTG诱导产酶一次；（2）待溶氧上升至80-100%，进行补料培养，控制温度30-38℃、溶氧20-30％、pH ***；（3）当菌体细胞浓度达到20-35 g/L、57-83 g/L，分别加入IPTG诱导产酶，控制温度36-38℃、溶氧20-30%、pH ***，诱导8-20 h。
  • 6.根据权利要求2、4、5任一所述的方法，其特征在于，所述诱导的诱导温度为36-38℃、诱导剂IPTG的终浓度为*** mM。
成果亮点
团队介绍
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