一株表达角蛋白酶的重组毕赤酵母及其应用

1.一种重组毕赤酵母发酵生产角蛋白酶的方法，其特征在于，是将重组菌的种子培养液，按接种量12-13％接种到装液量25-30％的3L全自动发酵罐中，以50％氨水和磷酸溶液控制pH ***，温度30℃，调节搅拌转速为500rpm，通气量维持在2vvm；当甘油耗尽，开始以指数流加方式流加350mL的含12mL/L PTM1的50g/L的甘油，维持比生长速率在***，并逐渐将搅拌转速调节到1000rpm，通气量调节到4vvm；待甘油再次耗尽，继续保持体系中基质匮乏状态1h且DO>60％后，开始流加100％甲醇诱导产酶，以反馈流加的方式维持培养基中的甲醇的体积浓度在***％；所述重组菌为以毕赤酵母SMD1168为宿主，以pPIC9k为载体，表达了角蛋白酶；编码所述角蛋白酶的基因的序列如SEQ ID ***所示。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，种子培养液的获得是将重组菌株转接到YPD平板上，挑取单菌落接种到含有100mL的YPD培养基的1L摇瓶中，置于摇床中30℃，220rpm培养24h作为种子液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵培养基为BSM培养基：5％磷酸***，K2SO4 ***，CaSO4 ***，MgSO4·7H2O ***，KOH ***，甘油***，***。

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