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一种高效分泌表达克氏原螯虾钙调蛋白基因的方法
发布时间: 2022-05-12
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
发明专利
行业领域：
其他
成果介绍
- 1.一种高效分泌表达克氏原螯虾钙调蛋白(CaM)基因的基因工程菌，其特征在于，是将克氏原螯虾CaM基因以pMA0911为表达载体，以枯草芽孢杆菌为宿主构建得到的基因工程菌，所述枯草芽孢杆菌是枯草芽孢杆菌WB400、WB600或WB800中的一种。
- 2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述CaM基因的序列如***所示。
- 3.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌是***。
- 4.一种构建权利要求1-3任一所述基因工程菌的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：(1)PCR扩增或化学合成CaM基因序列；(2)将CaM基因与表达质粒pMA0911连接，构建重组质粒pMA0911-CaM；(3)将重组质粒pMA0911-CaM转化枯草芽孢杆菌，筛选验证获得阳性转化子。
- 5.权利要求1-3任一所述基因工程菌在分泌生产CaM蛋白中的应用方法。
- 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：将重组菌用种子培养基活化后，以5-8％接种量菌液转入装液量50％-60％的发酵罐中，通气量***，搅拌转速300-400r/min，pH不作控制，37℃培养；发酵培养基成分为玉米淀粉14-22g/L，蛋白胨8-12g/L，酵母抽提物9-15g/L，硫酸铜***。
- 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将重组菌用种子培养基活化后，以5％接种量菌液转入装液量***的3L发酵罐中，通气量***，搅拌转速400r/min，pH不作控制，37℃培养；发酵培养基成分为玉米淀粉18g/L，蛋白胨10g/L，酵母抽提物12g/L，硫酸铜***。
- 8.一种高效分泌表达克氏原螯虾CaM基因的方法，其特征在于，以重组表达了克氏原螯虾CaM基因的枯草芽孢杆菌为生产菌株，发酵生产重组钙调蛋白CaM。
- 9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，将CaM基因与表达质粒pMA0911连接，构建重组质粒pMA0911-CaM，然后转化枯草芽孢杆菌表达菌株WB600，获得重组菌；发酵培养基成分为玉米淀粉14-22g/L，蛋白胨8-12g/L，酵母抽提物9-15g/L，硫酸铜***；于37℃通风发酵。
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