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一种能降解黄曲霉毒素B1的裂解酶的分离纯化方法
发布时间: 2022-05-12
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
发明专利
行业领域：
其他
成果介绍
- 1.一种能降解黄曲霉毒素B1的裂解酶的分离纯化方法，其特征在于，所述方法是从解淀粉芽孢杆菌***的发酵液中，依次利用硫酸铵分级沉淀、DEAEFF阴离子交换层析和Superdux7510/300GL凝胶过滤层析来分离纯化得到的。
- 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)硫酸铵分级沉淀：解淀粉芽孢杆菌***发酵液经0-40％硫酸铵沉淀后离心，然后将沉淀的蛋白复溶，透析；(2)透析后的蛋白溶液经微孔滤膜过滤后，上样于DEAEFF阴离子交换柱，用磷酸盐缓冲液冲洗，然后用含1mol/LNaCl的磷酸盐缓冲液进行恒梯度洗脱，收集具有降解AFB1活性的组分；(3)将上一步收集得到的活性组分上样于Superdux7510/300GL凝胶过滤层析柱，用磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集具有降解AFB1活性的组分。
- 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为10-50mmol/L，***。
- 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硫酸铵沉淀是使用20-40％硫酸铵沉淀。
- 5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为20mmol/L，***。
- 6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述复溶是使用20mmol/L、***的磷酸盐缓冲液。
- 7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中收集的是第二个蛋白吸收峰的蛋白溶液。
- 8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括： (1)解淀粉芽孢杆菌***发酵液经40％硫酸铵沉淀，然后于4℃、10000r/min离心10min，将沉淀蛋白用20mmol/L、***的磷酸盐缓冲液复溶，透析过夜； (2)透析后的蛋白溶液通过***μm微孔滤膜过滤，上样于HiPrep16/10DEAEFF离子交换柱，用20mmol/L、***的磷酸盐缓冲液冲洗，然后用含1mol/LNaCl的20mmol/L、***的磷酸盐缓冲液进行恒梯度洗脱，收集第二个蛋白吸收峰； (3)将上一步收集的蛋白溶液上样于Superdux7510/300GL凝胶过滤层析柱，用20mmol/L、***的磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集第三个蛋白吸收峰。
- 9.权利要求1-8任一所述方法得到的裂解酶。
- 10.权利要求9所述裂解酶在降解黄曲霉毒素方面的应用。
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