本发明涉及一种驱油微生物的高密度浓缩菌剂发酵和冻干制备方法,属于微生物驱油高密度浓缩菌剂制备技术领域。方法步骤为:a、采用高密度培养技术得到高浓度发酵液;b、发酵液经无菌生理盐水洗涤2~3次离心浓缩;c、加入适量冻干保护剂,混合均匀;d、将菌液均匀分装到冻存管中;e、经真空冷冻干燥机冻干后即可制备成菌剂。本发明可以得到较高浓度的浓缩菌剂,同时制备其冻干粉,操作简单有效,菌种活性高,浓缩菌剂菌浓可以达到109~1010cfu/mL,冻干后菌粉含菌量为1010~1011cfu/g,保藏时间较长,且携带比较方便,减少了驱油现场菌剂的运输成本。