本发明公开了一种一步发酵分离耦合生成二元胺的方法,将大肠杆菌培养成的种子液接入发酵罐的发酵培养基中,在28-40℃、通气量***下培养12-36h,启动分离耦合装置后得到的细胞发酵液和不含细胞发酵清夜循环回发酵罐继续发酵过程,在分离耦合装置吸附的二元胺进入洗脱精制环节。本方法可用于生产二元胺时,将二元胺前体氨基酸发酵和二元胺脱羧酶发酵在一个设备内一步发酵完成,缩短生产周期提高设备经济效应,同时发酵分离耦合将发酵液中的二元胺异位分离移出来减少二元胺对生产菌株的抑制作用,提高单位菌体生产能力和原料利用效率。