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技术领域

本发明涉及荧光探针技术领域，特别涉及一种连续检测肼和次氯酸根的检测方法。

背景技术

环境污染的监测及其防治已成为全球性关注的热点之一。肼(N2H4)是一种重要的工业化学品，被广泛地应用于医药、农药、纺织染料、感光材料、乳化剂、腐蚀抑制剂等材料的制备。然而，它也是一种高毒性水溶生化试剂，可通过口鼻呼吸和皮肤渗透等途径对人体肝脏、呼吸系统和神经系统造成损伤，并具有致癌、致畸、致突变的“三致效应”。世界卫生组织和美国环境保护局(EPA)规定肼的阈限值为0.11mol/L。由于N2H4在生理和病理过程中的多重作用，近年来肼的高效检测已受到人们的高度关注。

另一方面，次氯酸(HClO)是一种活性氧簇，在日常生活和防御外来病原体对宿主的入侵方面都起着重要的作用。它是一种强氧化剂，因此可以用作漂白剂、氧化剂、除臭剂和消毒剂。然而，生物体内过量的次氯酸会损害宿主自身的组织，引发一系列的疾病，例如肾病、动脉硬化症和关节炎等。

近年来，荧光技术作为一种新兴的检测手段，具有灵敏度高、响应速度快、检出限低等特点，被广泛应用于生物化学、细胞生物学和分析化学等相关领域，颇受人们的青睐。但目前只有检测肼的肼荧光探针，或只能检测次氯酸根的次氯酸根荧光探针，检测对象单一，从而使荧光检测的操作麻烦，成本较高。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种连续检测肼和次氯酸根的检测方法，旨在解决现有荧光探针的检测对象单一的问题。

为实现上述目的，本发明提出一种连续检测肼和次氯酸根的检测方法，包括以下步骤：

用含醛基的荧光素化合物溶液检测肼，得到含有中间体A的溶液B；

用所述溶液B检测次氯酸根。

可选地，所述含醛基的荧光素化合物包括如结构式(I)所示的结构：

可选地，所述用含醛基的荧光素化合物溶液检测肼，得到含有中间体A的溶液B的步骤之前，还包括以下步骤：

将荧光素在40～60℃溶解于甲醇中，再依次加入氢氧化钾溶液和三氯甲烷，在催化剂的作用下反应，反应完成后调节pH至7～8，将析出的沉淀过滤，得到粗产品；

将所述粗产品通过硅胶柱层析纯化，得到含醛基的荧光素化合物。

可选地，所述催化剂包括18-冠-6。

可选地，所述用含醛基的荧光素化合物溶液检测肼，得到含有中间体A的溶液B的步骤之前，还包括：

将含醛基的荧光素化合物用有机溶剂配制成第一溶液，再将所述第一溶液用缓冲液稀释，得到含醛基的荧光素化合物溶液。

可选地，所述有机溶剂包括二甲基亚砜、乙腈、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺和丙酮中的任意一种。

可选地，所述缓冲液包括HEPES缓冲液。

可选地，所述含醛基的荧光素化合物溶液中，所述HEPES缓冲液与有机溶剂的体积比为(5～95)：5。

可选地，所述HEPES缓冲液的pH值为6～10。

本发明提供的连续检测肼和次氯酸根的检测方法，含醛基的荧光素化合物溶液发射很强的绿色荧光，当与待测物肼反应后，得到含有中间体A的溶液B，中间体A中由于碳氮双键(C＝N)的异构化引起分子内非辐射跃迁过程增强，因此溶液B几乎无荧光；再将溶液B用来检测次氯酸根，利用次氯酸根的氧化性，将中间体A中的C＝N键打断，氧化成醛类化合物，溶液的绿色荧光得以恢复。因此，本发明提供的检测方法可依次实现对有害物质肼和次氯酸根的检测，更加高效，且成本较低。