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一种强广谱启动子及其应用
发布时间: 2022-04-01
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
发明专利
行业领域：
其他
成果介绍
本发明公开了一种强广谱启动子及其应用,属于基因工程领域。本发明通过分子手段将原核细菌保守启动子序列插入一个具有高活力的酿酒酵母启动子的非核心区域,得到的一种强广谱启动子有多个宿主,该启动子在大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母中均具有很强的启动子活力,满足目前对广谱的分子改造工具和基因表达框的需求。
- 1.一种强广谱启动子，其特征在于，所述启动子序列如SEQ ID ***所示。
- 2.根据权利要求1所述的强广谱启动子，其特征在于，所述强广谱启动子可以应用于多个宿主，所述多个宿主包含大肠杆菌、枯草芽孢杆菌或酿酒酵母。
- 3.权利要求1所述强广谱启动子的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： (1)挑选一个具有高活力的酿酒酵母启动子； (2)在上述启动子非核心区域插入原核细菌保守启动子序列； (3)将构建好的新启动子和荧光蛋白基因相连，其中采用原核细菌通用的核糖体结合位点； (4)将启动子和荧光蛋白基因一起分别插入到多个宿主的表达载体上，并转入相应宿主，通过荧光显微镜和荧光酶标仪来进行定性和定量。
- 4.权利要求3中所述的构建方法，其特征在于，所述高活力的酿酒酵母启动子Pmin，其序列如SEQ ID ***所示。
- 5.权利要求3中所述的构建方法，其特征在于，所述原核细菌保守启动子序列包含TTGACA和TATAAT两段DNA序列，其间隔序列如SEQ ID ***所示。
- 6.权利要求3中所述的构建方法，其特征在于，所述原核细菌通用核糖体结合位点序列如SEQ ID ***所示。
- 7.一种广谱的遗传霉素抗性基因表达框，其特征在于，序列如SEQ ID ***所示，所述序列包含权利要求1中所述强广谱启动子、权利要求6中所述原核细菌通用核糖体结合位点、遗传霉素抗性基因、原核转录终止子和真核转录终止子。
- 8.一种大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母穿梭载体，其特征在于，序列如SEQ ***所示，所述序列包含有大肠杆菌载体pUC18复制子、枯草芽孢杆菌载体pUB110复制子、酿酒酵母载体pY26复制子和权利要求7中所述广谱的遗传霉素抗性基因表达框。
- 9.权利要求8所述的一种大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母穿梭载体在蛋白合成、代谢产物生产或载体构建方面的应用。
- 10.权利要求1所述强广谱启动子在蛋白合成、代谢产物生产或载体构建方面的应用。
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