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一株产减毒类脂A的Cronobacter sakazakii突变株及其应用
发布时间: 2022-04-01
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
发明专利
行业领域：
其他
成果介绍
摘要本 发 明 公 开 了 一 株 产 减 毒 类 脂 A 的Cronobacter sakazakii突变株及其应用，属于基因工程技术领域。本发明的 C r o n o ba c t e rsakazakii突变株的ESA-03574基因片段进行敲除，使Cronobacter sakazakii菌株对阳离子抗菌肽抗性显著降低、更容易被抗菌肽杀死，本发明的Cronobacter sakazakii突变株细胞激活TLR4免疫通路的能力减弱，对细胞毒性减弱，有利于疫苗佐剂的开发。
1 .一种Cronobacter sakazakii的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌缺失了ESA-03574基因片段；所述ESA-03574基因片段的核苷酸序列是SEQ ID NO:1的序列。2 .根据权利要求 1所述的基因工程菌 ，其特征在于 ，所述基因工程菌为无抗性***ΔESA-03574，以Cronobacter sakazakii BAA894为出发菌、缺失了核苷酸序列为SEQ ID NO:1的ESA-03574基因片段。3 .根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌的构建方法如下：将人工构建的ESA-03574敲除片段电转化入含pKD46质粒的***，获得突变株***ΔESA-03574-loxPkan，再化转入pKD-Cre质粒，通过位点特异性重组敲除卡那霉素抗性基因；去除pKD-Cre质粒后获得无抗性lipid A的基因结构突变的基因工程菌。4 .根据权利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，所述ESA-03574敲除片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。5 .一种降低Cronobacter sakazakii对阳离子抗菌肽抗性的方法，其特征在于，所述方法是敲除Cronobacter sakazakii菌的ESA-03574基因片段；所述Cronobacter sakazakii菌株为BAA894；所述ESA-03574基因片段的核苷酸序列是SEQ ID NO:1的序列；且敲除了ESA-03574基因片段的Cronobacter sakazakii菌在pH5 .0条件下作用。6 .一种降低Cronobacter sakazakii对HEK-Blue HEK-4细胞刺激作用的方法，其特征在于，所述方法是敲除Cronobacter sakazakii菌的ESA-03574基因片段；所述Cronobactersakazakii菌株为BAA894；所述ESA-03574基因片段的核苷酸序列是SEQ ID NO:1的序列；且敲除了ESA-03574基因片段的Cronobacter sakazakii菌的菌浓度为105～106CFU/mL。7 .权利要求1-4任一所述基因工程菌在阳离子抗性肽及在疫苗佐剂上的应用。
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