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一种表达人源乙醛脱氢酶基因的基因工程菌及其应用

发布时间: 2022-04-01

基本信息

合作方式： 技术转让
成果类型： 发明专利
行业领域：
其他
成果介绍

本发明公开了一种表达人源乙醛脱氢酶基因的基因工程菌及其应用,属于基因工程和酶技术领域。本发明的ALDH2基因高效表达组件Trp1L URA3 TPIp ALDH2 TPIt Trp1R是整合到了酿酒酵母W303 1A的基因组上,与游离质粒表达相比,提高了基因表达的稳定性,并且采用的组成型启动子,在发酵过程中没有诱导剂的加入,产物相对来说比较安全。在发酵96h时,产乙醛脱氢酶的比活达到***。在250mg/100mL浓度的乙醇中,产乙醛脱氢酶的比酶活达到***,在pH 3缓冲液中,产乙醛脱氢酶的比活达到***。本发明选用酿酒酵母作为宿主菌,一方面保持了酶的活性,另一方面提高了产品的安全性,为解酒药的研发提供了一条新的途径和理论基础

  • 1.一种基因工程菌，其特征在于，以尿嘧啶营养缺陷型单倍体酿酒酵母Saccharomycescerevisiae W303-1A为宿主，表达SEQ ID ***所示的基因；所述表达SEQ ID ***所示的基因，是将表达组件Trp1L-URA3-TPIp-ALDH2-TPIt-Trp1R整合至酿酒酵母W303-1A的基因组上。
  • 2.构建权利要求1所述的基因工程菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)构建含SEQ ID ***所示基因的基因表达组件Trp1L-URA3-TPIp-ALDH2-TPIt-Trp1R；(2)将所述基因表达组件Trp1L-URA3-TPIp-ALDH2-TPIt-Trp1R转化至酿酒酵母细胞中。
  • 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法是：(1)将SEQ ID ***所示的核苷酸序列与质粒pYX212连接，构建重组质粒pYX212-ALDH2,；(2)以pYX212-ALDH2为模板，构建含有Trp1基因启动子和终止子的基因片段TPIp-ALDH2-TPIt；(3)分别扩增Trp1基因的上游同源臂Trp1L和下游同源臂Trp1R，并将Trp1L、Trp1R、TPIp-ALDH2-TPIt片段以及URA3基因通过融合PCR连接，构建表达组件Trp1L-URA3-TPIp-ALDH2-TPIt-Trp1R。
  • 4.权利要求1所述的基因工程菌在制备含乙醛脱氢酶的产品中的应用。
  • 5.一种乙醛脱氢酶的生产方法，其特征在于，将权利要求1所述的基因工程菌接种至YPD培养基中，28～30℃培养72～96h。
成果亮点
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