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一种利用扦插繁殖鉴定藜麦霜霉病抗病性的方法

发布时间: 2022-03-02

来源: 科技服务团

基本信息

合作方式: 技术服务
成果类型: 新技术
行业领域:
农、林、牧、渔业
成果介绍

本发明的目的通过下述技术方案实现,具体步骤为:

(1)   扦插生根液配制

本发明扦插生根液由扦插生根液A和扦插生根液B配置而成,比例为10:1。

扦插生根液A:称量每千克藜麦秸秆加1L水,高压灭菌后每升加1ml枯草芽孢杆菌菌液(浓度为3.5×109cfu/mL),置于26℃发酵30 d,发酵后过滤出发酵浸提液。

扦插生根液B:称取维生素B1、磷酸二氢钾、硫酸镁、硝酸铵溶于无菌水,配制成培养液,上述培养液中维生素B1的浓度为2.5mg/L、阿司匹林0.5 mg/L、硝酸铵的浓度为5.5mg/L、磷酸二氢钾6.5mg/L、硫酸镁3.5mg/L所述培养液的pH值为6.8~7.0。

(2)    采集扦插穗

在藜麦母株上截取长势好、无病虫害粗细为0.8cm~1.2cm、长约30 cm的细枝;同时剪去插穗上大的叶片(约占总叶面积的3/4)。去除叶片时,全部摘除10 cm以下的大小叶片,尽量保留10 cm以上小叶。扦插穗切口位于扦插穗叶柄疤痕下0.5 cm~1.0 cm处;将扦插穗切口修剪为与扦插穗轴线呈约50~60度角的斜面,切面平滑、韧皮部不留毛茬且无损伤。

(3)    扦插

采集修剪好的扦插穗切口处浸泡于35%的啤酒中消毒5 min~8 min。消毒后备用。将上述扦插生根液中浸泡分装于三角瓶或烧杯等容器,生根液液面高度约3.5 cm~4.0 cm,再将消毒的插穗放入插生根液中进行生根,扦插液蒸发后及时补存至上诉液面高度。最后将扦插苗子置于温度为将其置于18~20℃人工气候箱、光照3500 lx,光暗交替(光照时间6 h)培养,待扦插穗切扣处明显看到白色细根时,然后再将气候箱调为温度20~22℃、光照6500 lx(光照时间10h、黑暗14 h)培养。

(4)   抗病性鉴定

第一步:病原物收集:田间采集具有藜麦霜霉病症状的病叶置于10℃保藏备用,保藏的新鲜病叶24h为最佳使用期。使用毛刷将新鲜病叶的霜霉菌霉层刷除,用无菌水冲洗3次,然后将叶片用湿润的脱脂棉花包裹、将其置于18℃人工气候箱、光照1200 lx(光暗交替、光照时间6 h)培养,脱脂棉花处保湿培养。36 h后扫刷病叶长出的新鲜霉层(霜霉病菌孢子囊)并收集到1.5mL离心管置于10℃保藏备用。

第二步:用无菌水配制含吐温为80体积比为1.5%的溶液,取收集好的藜麦霜霉病菌孢子囊置于1.5%的吐温无菌水溶液中,调节孢子囊悬浮液浓度为1×108个孢子囊/毫升。选择插穗根系长至约5cm左右扦插穗进行接种。叶片正面边缘用移液器接种30微升的孢子囊悬浮液。接种后20℃黑暗培养15 h,然后然后再将气候箱调为温度20~22℃、光照6500 lx(光照时间10h、黑暗14 h)培养。每株接种15片叶子、重复3次,5 d后调查结果。

本发明具有以下有益效果:

1、对于一些具有优良形状的藜麦品种,种子繁殖会使其的性状丧失,而扦插则能使繁殖的后代仍然具有原优良性状,达到准确评价种质资源抗病性的目的。相比种子繁殖苗子繁殖数据更科学。

2、本发明特别适合从数量庞大的种质资源中筛选抗病品种,提高鉴定效率;且能减少了不同操作人员间的人为误差。

3、藜麦霜霉病在田间属于藜麦生长中期病害,采用插穗评估鉴定结果能够准确反映,藜麦在田间的抗病能力。

4、本发明采用扦插藜麦穗生根后利用穗上叶片评估,相比传统霜霉病评价的叶盘漂浮法,数据准确、重复性高,接近田间抗病性情况。

5、将藜麦枝剪下进行扦插,可大大节约了用种量;还能经济利用繁殖材料、增加苗子数量。

 

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