本发明公开了一种改造蛋白折叠分泌途径增强葡萄糖氧化酶分泌的方法,属于基因工程技术领域。本发明采用基因重组技术将毕赤酵母中KAR2、CNE1、ERO1、SSA4、SSO2、SEC53、BMH2、HRD1、UBC1、GCN4等基因分别克隆连接到毕赤酵母表达载体pGAPZ等系列衍生质粒连接,并与GOD共表达转化入PichiapastorisGS115菌株中,考察其效果,并通过模块化组合优化,经筛选鉴定得到一株较原有菌株增强分泌表达葡萄糖氧化酶的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在3L发酵罐上酶活***。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。