一种体外快速组装非磷酸化DNA片段的方法

本发明公开了一种体外快速组装非磷酸化DNA片段的方法，属于基因工程技术领域。本发明在需要组装构建的目标片段两末端引入同源臂序列，采用热循环进行变性‑退火‑切割‑连接的方式，实现快速体外DNA组装构建。在***内一次可以实现2‑4个非磷酸化DNA片段的高效快速的无缝组装。本发明可用于常规的DNA重组构建，并实现高通量操作，特别适合于对酶基因和合成途径的体外高效组装上，可引入丰富的组合突变多样性，进行快速定向进化和合成生物学操作。