本发明公开了一种利用纤维素固定化CBDEndoS融合酶的方法,属于固定化酶技术领域.本发明利用CBDEndoS的CBD标签将融合蛋白特异性固定于纤维素微球上,不同于传统固定化酶"先纯化后固定",实现了一步固定纯化,将粗酶中的CBDEndoS蛋白固定在纤维素载体上,操作简单,方便快速,大大简化了固定化步骤.应用本发明的方法制备的固定化酶反复使用5次后,酶活仍保持在初始酶活88%以上;固定化酶于4℃条件下保存30天后,酶活仍保持在初始酶活90%以上.本发明有望实现工业化,有助于EndoS酶在抗体修饰研究领域的广泛应用.