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特异性显色底物的合成和显色培养基的研究

发布时间: 2019-05-08

来源: 科创中国_资源共享平台

基本信息

合作方式:
成果类型: 新技术
行业领域:
其他
成果介绍
1)在分析蜡样芽孢杆菌生化反应的基础上,筛选出蜡样芽孢杆菌特异性酶底物xglu和卵磷脂,研究开发出集分离培养和判定于一体的蜡样芽孢杆菌显色培养基,通过纯菌测试和实际样品检验,结果表明,研制的HKM蜡样芽胞杆菌显色培养基和国外科玛嘉蜡样芽胞杆菌显色培养基检测效果无明显差异,可以达到相近的检测限和灵敏度,特异性达到90%以上,目标菌生长率不低于70%,优于国内蜡样芽胞杆菌显色培养基,并且可以在24h内报告粗筛的结果;2)在原有O157第一代显色培养基配方的基础上,添加不同的显色底物以及抑制剂,使该显色培养基底色从红色调整至无色,通过探索大肠杆菌O157特异性酶与相应底物的反应机理,诱导酶的代谢及底物与酶的结合,从而使大肠杆菌O157显色培养基显色特征性更强,使特异性达到90%以上,目标菌生长率不低于70%,HKM大肠杆菌O157显色培养基和国外科玛嘉大肠杆菌O157显色培养基检测效果无明显差异,可以达到相近的检测限和灵敏度,优于第一代大肠杆菌O157显色培养基、国外梅里埃和国内大肠杆菌O157显色培养基,并且可以在24h内报告粗筛的结果;3)合成出了中间体四乙酰αD溴代葡萄糖、N(3氯2羧基苯基)甘氨酸、N(4溴3氯2羧基苯基)甘氨酸、1乙酰基5溴4氯3吲哚基乙酸酯、1(1乙酰基5溴4氯3吲哚基)2,3,4,6四乙酰基βD葡萄糖苷以及5溴4氯3吲哚基βD葡萄糖苷特异性显色底物,合成的显色底物纯度可达到99%。利用国外进口显色底物与本项目合成的5溴4氯3吲哚基βD葡萄糖苷特异性底物分别制成蜡样芽胞杆菌显色培养基,通过蜡样芽胞杆菌的检测效果进行显色底物的评价,在蜡样芽胞杆菌的显色效果方面,本项目合成的底物与进口的底物对蜡样芽胞杆菌的显色效果一致;4)制定了蜡样芽胞杆菌特异性显色培养基和大肠杆菌O157特异性显色培养基相对应的企业标准;5)构建了蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌O157显色生化快速检测试剂盒;6)申请专利2个(1)吴清平, 韦献虎, 张菊梅. 一种1乙酰基卤代吲哚基3乙酸酯的合成方法. 申请号:201310062354.4(2)吴清平, 韦献虎, 马延霞, 张菊梅, 蔡芷荷, 卢勉飞. 一种基于4甲基伞形酮的合成多种糖苷的方法. 201510245244.07)发表论文7篇,其中SCI 5篇(1)Xianhu Wei, Yanxia Ma, Qingping Wu, Jumei Zhang, Zhihe Cai, Mianfei Lu. An Improved Helferich Method for the α/βStereoselective Synthesis of 4Methylumbelliferyl Glycosides for the Detection of Microorganisms[J]. Molecules 2015, 20, 2168121699.(2)卢勉飞, 蔡芷荷, 陈霖熙, 邱国建, 吴清平, 杨宁. 大肠杆菌O157 显色培养基检测效果的评价[J]. 微生物学通报, 2014, 41(7): 14561462.(3)Xiaojuan Yang, Qingping Wu, Jumei Zhang, Jiahui Huang, Weipeng Guo, Shuzhen Cai. Prevalence and Characterization of Monophasic Salmonella Serovar 1,4,[5],12:i:of Food Origin in China[J]. PLOS ONE, DOI:10.1371/journal.pone.0137967.(4)Tengfei Xie, Qingping Wu, Xiaoke Xu, Jumei Zhang, Weipeng Guo. Prevalence and population analysis of Vibrio parahaemolyticus in aquatic products from South China markets[J]. FEMS Microbiology Letters, 362, 2015, fnv178.(5)Qinghua Ye, Qingping Wu, Huijuan Hu, Jumei Zhang, Huixian Huang. Prevalence, antimicrobial resistance and genetic diversity of Yersinia enterocolitica isolated from retail frozen foods in China[J]. FEMS Microbiology Letters, 362, 2015, fnv197.(6)Qinghua Ye, Qingping Wu, Huijuan Hu, Jumei Zhang, Huixian Huang. Prevalence and characterization of Yersinia enterocolitica isolated from retail foods in China[J]. Food Control, 61, (2016): 2027.(7)滕昆仑, 卢勉飞, 蔡芷荷, 吴清平, 石小帆. 运用显色培养基从食品微生物中鉴别蜡样芽孢杆菌[J]. 中国卫生检验杂志, 已录用.8)成果投入生产后,2015年销售额430.6万元和创利税超过80万元。9)建立起了年生产能力10万瓶的大肠杆菌O157、蜡样芽胞杆菌显色培养基及配套试剂生产线。
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