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干细胞冻存液及干细胞的冻存方法
发布时间: 2025-10-15
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
发明专利
行业领域：
生物与新医药技术,医药生物技术
成果介绍
深圳市北科生物科技有限公司针对传统干细胞冻存液 “二甲基亚砜（DMSO）浓度高致毒副作用、动物血清引入外源风险、冻存后细胞活性低” 的行业痛点，研发了新型干细胞冻存液及配套冻存方法（发明专利申请公布号：CN 101990888 A）。该成果核心包含两部分：1. 新型复合冻存液配方：突破传统单一 DMSO 体系，采用 “渗透性保护剂 + 非渗透性保护剂 + 可选人源成分” 组合 —— 基础配方含 5-10% 体积 DMSO（渗透性保护剂，穿透细胞膜防止冰晶损伤）、3-6% 重量羟乙基淀粉（HES，非渗透性保护剂，维持细胞外渗透压），可按需添加 10-80% 体积人 AB 血清（提供营养且避免动物源性风险）。最优配方（5% DMSO+5% HES+10% AB 血清）可使干细胞复苏活率达 90% 以上，显著高于传统 10% DMSO 体系（活率约 70%）；2. 标准化冻存工艺：消化后的干细胞（浓度 1×10⁶-4×10⁷个 /ml）与冻存液混合制成悬浮液，经程序降温（1℃/ 分钟）至 - 80℃保存 8-24 小时后，转移至液氮长期保存；复苏时可用冷生理盐水、冷 HES 注射液或 DME
成果亮点
1. 低毒复合配方突破传统安全瓶颈：传统冻存液多采用 10% DMSO 单一成分，临床输注易引发过敏、急性肾衰等毒副作用。本成果将 DMSO 浓度降至 5-10%，搭配 3-6% HES 协同保护 ——HES 可减少 DMSO 用量，同时通过空间位阻效应降低冰晶对细胞的机械损伤，实验显示 5% DMSO+5% HES 配方的细胞凋亡率比 10% DMSO 体系降低 40%，且无明显毒副作用；2. 人源成分适配临床需求：创新引入人 AB 血清作为可选成分（10-80% 体积），替代传统胎牛血清（FBS），避免动物源性病毒、支原体污染风险，符合临床级细胞制备标准；同时提供无血清配方（仅含 DMSO+HES），适配过敏体质患者与无血清培养体系，适用场景比传统冻存液扩大 60%；3. 宽适配性与标准化工艺：冻存液对细胞浓度（1×10⁶-4×10⁷个 /ml）、洗涤液（冷生理盐水、HES 注射液等）均无严格限制，实验验证不同浓度细胞复苏活率差异无统计学意义（P=0.466），洗涤液对活率影响＜2%；配套的程序降温工艺可通过常规冻存盒或程控降温仪实现，无需特殊设备，单份样本冻存成本降至传统方法的
团队介绍
1. 核心研发人员（按贡献排序）- 戴国胜（深圳市北科生物科技有限公司，研究员）：项目牵头人，长期深耕干细胞冻存技术，主导复合冻存液配方设计，突破 DMSO 与 HES 协同保护机制，发表相关核心论文 20 余篇，获广东省生物医药领域科技奖励 1 项，在干细胞冻存试剂研发领域具备权威地位；- 张炳强（高级工程师）：负责冻存液成分优化与浓度筛选，通过单因素方差分析确定 5% DMSO+5% HES 为最优基础配比，建立成分浓度与细胞活性的关联模型；- 李国喜（研究员）：主导标准化冻存工艺开发，验证细胞浓度、降温速率、洗涤液对冻存效果的影响，形成可推广的操作规范；- 郑意端（工程师）：负责临床前安全性验证，完成冻存液残留检测、细胞毒性测试与动物输注实验，证明 5% DMSO 配方无明显毒副作用；- 胡祥（研究员）：参与人 AB 血清适配性研究，验证不同血清浓度对细胞活率与分化能力的影响，确保配方的人源化与临床兼容性；2. 技术支持团队：依托深圳市北科生物科技有限公司的 GMP 级细胞实验室，配备流式细胞仪、程控降温仪、液氮存储系统等设备，同时与深圳本地三甲医院（如深圳大学总医院）合作开展临
成果资料
产业化落地方案
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