科创中国
高效、抗突变、智能化新冠病毒核酸检测方法的建立
发布时间: 2021-03-25
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
发明专利
行业领域：
生物产业,制造业
成果介绍
技术路径：设计引物→合成引物→PCR扩增→转录（UTP-地高辛标记）、电泳→得到CoV-2019反义RNA探针→构建载体→转染细胞→细胞培养→ISH→显色、镜检→细胞RNA提取和cDNA合成→RT-qPCR比较检测效率及灵敏度→调整实验条件、优化ISH方案→应用于患者样本→自动化分析
创新点：1.利用原位杂交技术实现新冠病毒（SARS-CoV-2）核酸单细胞水平的可视化检测。合成地高辛反义RNA探针，在不需要RNA提取、反转录以及PCR扩增操作的前提下，直接对病人阳性样本检验，实现单细胞水平的定量检测，得到的结果为病毒RNA含量，而非简单的阳性或阴性结论。简化了检测流程，缩短检测时间，为提高大面积医疗筛查效率提供帮助。2.建立超高灵敏度的检测方法，特异性强，对突变不敏感。由于传统PCR检测病毒需要进行逆转录PCR扩增，并且对突变敏感，假阴性率较高，而基于CRISPR-Cas13的“SHERLOCK”法需要逆转录、预扩增以提高RNA拷贝数，在病毒的实际筛查中限制了检测效率。因此具有高效、准确、耐突变特点的ISH检测方法能弥补其他核酸分子检测方法的不足，有效筛查出感染早期细胞，实现疫情防控的早发现、早隔离、早治疗。3.原位杂交技术的改良。传统ISH过程大约需要3天，不能满足当前进行快速筛查的需求。为节省检测时间和劳动工作，我们测试得到最小杂交时间,并对抗体孵化时间进行优化。在洗涤步骤中,我们将在保证信号强度不受影响的情况下优化洗涤步骤和洗涤时间,最后,综合得到一个改良的ISH检测方法，旨在节约实际检测过程中的人力物力和时间成本。4.全自动检测方法的建立。手机具有高质量的传感器、直观的用户界面、强大的计算能力以及通信能力，将本项检测方法结合人工智能和机器设备,利用手机摄像头作为便携式读取器，结合5 G技术，将实现自动集成检测结果报告及检测系统的结果图像采集自动化。
可应用场景：可用于新冠肺炎患者的筛查，本研究所建立的全自动检测方法及也可其他病毒感染的筛查。
知识产权归属：专利申请人
成果亮点
团队介绍
成果资料
下载app