科创中国

生物与新医药技术

本发明公开了一种反式茴香脑加氧酶突变体的高通量筛选方法及突变菌株和突变体，包括以反式茴香脑加氧酶基因为模板，进行易错PCR，获得反式茴香脑加氧酶突变体文库；将所述反式茴香脑加氧酶反应底物添加入含有反式茴香脑加氧酶突变体的溶液中进行催化反应，将反应液与2,4‑二硝基苯肼进行显色反应，并加入碱溶液及有机溶剂反应，测定吸光度。本发明通过易错PCR构建突变库，并建立以2,4‑二硝基苯肼为显色剂，酶标仪测定OD470为基础的高通量筛选方式，筛选合成洋茉莉醛重组菌株的突变菌株，该方式具有高效、精准、快速的优势，突变株LSQ‑3对于合成洋茉莉醛、对茴香醛以及香兰素的催化效率均显著提高，具有良好的应用价值。

丙烯基苯型精油单分是通过物理的方法从植物精油中提取的某一种丙烯基苯化合物，这类化合物的共同特征是具有丙烯基侧链，并且在苯环上具有甲氧基取代基团，常被作为合成带有苯环结构的名贵香料和药物的起始物(如香草醛、洋茉莉醛、茴香醛等)。由于化学合成香料在香料生产上存有：香料化合物中残留的化学物质给人体健康带来危害、化学合成会带来环境的污染、化学合成反应立体选择性差而导致产物为外消旋体等的缺陷。目前，生物合成香料化合物的技术越来越受到人们的关注。本发明利用本实验室构建的重组质粒PGEX-6P-1-tao为模板，通过易错PCR的方式构建突变库，并建立以2,4-二硝基苯肼为显色剂，酶标仪测定OD470为基础的高通量筛选方式，筛选合成洋茉莉醛重组菌株的突变菌株，该方式具有高效、精准、快速的优势。获得的突变体LSQ-3对于合成洋茉莉醛、对茴香醛以及香兰素的催化效率均有提高，体现了良好的应用价值。

研究团队长期从事生物催化与发酵工程领域的研究，主要承担《生物催化工艺学》、《有机酸工艺学》、《生物催化与手性技术》等课程的讲授工作。以责任作者或第一作者发表论文70余篇，其中SCI收录论文23篇；申请发明专利48项，授权发明专利31项，其中国际发明专利3项；参编专著1部。主持江苏省产学研合作项目等省部级、企业合作科研项目十余项；作为主要成员参加完成国家973计划、863计划、国家自然科学基金项目、国家科技支撑计划项目、企业合作项目等十余项。获得江苏省科技进步奖2项、中国商业联合会科学技术奖2项、中国石油和化学工业联合会技术发明和科学技术奖各1项、中国轻工业联合会科学技术进步奖1项、海南省科技进步奖1项，指导学生获得江苏省优秀硕士学位论文奖1项。